Agriculture, Fisheries and Aquaculture - Contrôle après récolte pour tubercules dormants

Résumé: Plusieurs conditions de test pour la détection simultanée du virus enroulement (PLVR) et le virus Y (PVY) dans les tubercules dormants et les feuilles en transcription reverse - la réaction en chaîne catalysée par la polymerase (RT-PCR) fût optimisé. Plusieurs facteurs se sont optimisées au stage ou la transcription reverse (RT) s'est produite au lieu du stage d'amplification (PCR) ce qui a affecté le résultat. Une concentration double de dNTP's (1.0mM) est requise durant le stage RT pour produire les bandes distinctes du PLRV et du PVY pour le duplex PCR en comparaison avec la concentration simple de dNTP's (0.5mM) pour le simplex PCR. De différentes proportions des primeurs antisense de PLRV et de PVY utilisé durant le stage RT ont affecté les subséquents duplex RT-PCR. L'amplification optimale des deux virus a été obtenue à une proportion de 0.90:0.49uM des primeurs antisense PLRV:PVY. Aussi, dans le multiplex PCR oligo dT:PLRV primeur antisense (1.0uM:0.65uM) au stage RT a amplifié distinctement les virus PVY, PLRV, PVS/PVM avec une combinaison de primeurs d'oligo dT 1.0uM, PVY sense primeur 1.0uM, Carla uni 0.4uM et PLRV antisense et sense primeur 0.4um au stage PCR. Une interaction du dNTP's et de la concentration du modèle RNA a été observée. Une concentration élevée de RNA a été requise pour la concentration simple du dNTP's comparé à la concentration double du dNTP's. L'application des conditions optimes aux tubercules infectés simplement et doublement a detecté les deux virus PLRV et PVY des tubercules qui étaient infecté naturellement dans le champs. Aussi, le multiplex RT-PCR a detecté le PVY, PLRV, PVM/PVS des plantes infectées naturellement, mais son application aux tubercules dormants a besoin de beaucoup plus d'évaluation au laboratoire et au champs.

¹Agricultural Certification Services Inc. / Agence de la pomme de terre du Nouveau-Brunswick, comp. 17, 385, chemin Wilsey, Fredericton, NB E3B 5N6